TOXINE OEDÉMATOGÈNE

TOXINE OEDÉMATOGÈNE

Bacillus anthracis est l'agent étiologique de la maladie du charbon. La virulence de cette bactérie a gram positif est liée a la présence de deux plasmides (px02, 90 kbp; px01, 180kbp) codant respectivement pour la synthèse d'une capsule et pour la production de deux toxines: la toxine œdématogène et la toxine létale. La toxine œdématogène est composée de deux protéines distinctes: l'antigène protecteur (pa, 85kda) qui reconnait un récepteur cellulaire spécifique et le facteur œdématogène (ef, 89kda) qui est la protéine enzymatiquement active. Ef est transférée dans les cellules cibles après s'être fixée sur le complexe pa-récepteur. Ef est une adenylcyclase soluble présentant la particularité d'être active uniquement en présence d'une protéine régulatrice eucaryote, la calmoduline. L'analyse structurale et fonctionnelle d’ef est le thème principal de ce travail. Nous avons tout d'abord clone le gene cya codant pour l'adenylcyclase de b. Anthracis par complémentation d'une souche cya d’e. Coli produisant de la calmoduline à partir d'un gene synthétique. Nous avons ensuite construit des formes tronquées du gène cya et les protéines correspondantes ont été purifiées a partir soit de b. Anthracis, soit de e. Coli. L'analyse de ces formes tronquées de ef, en associant des approches de biologie cellulaire et de biochimie, a permis de caractériser deux domaines fonctionnels. L'un situe dans la région n-terminale de la molécule (résidus 33 a 300) est lie a sa capacité d'entrer dans les cellules (fixation sur pa) et l'autre, situe dans fla région c-terminale, est lie a son activité enzymatique (résidus 260 a 800). Le site d'interaction de l'adenylcyclase avec son substrat a été caractérise et le residu lys 346, essentiel a la fixation de l'atp, a été identifie par mutagenèse dirigée. D'autre part, des expériences de fixation directe réalisées en présence de calmoduline suivies de coupures chimiques de l'enzyme, ont permis de localiser le domaine d'interaction et d'activation de la calmoduline dans les 150 derniers résidus de ef.

  • Aucune note. Soyez le premier à attribuer une note !

Ajouter un commentaire

Anti-spam